鴨ELISA試劑盒操作步驟；
鴨病毒性腸炎（DVE），又名鴨瘟（DP）是由鴨病毒性腸炎病毒（DEV）引起的鴨、鵝及多種雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性傳染病。傳播迅速，發(fā)病率和死亡率都很高，給我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。在鴨病毒性腸炎的免疫預(yù)防工作中，接種了鴨病毒性腸炎疫苗后，由于多種因素可能導(dǎo)致免疫鴨不產(chǎn)生或產(chǎn)生低水平鴨病毒性腸炎病毒抗體。
gB蛋白是病毒的囊膜蛋白，具有吸附、穿入、融合細(xì)胞以及細(xì)胞間傳播功能，具有良好的反應(yīng)原性及免疫原性，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生高水平的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)。本試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)鴨血清中抗鴨病毒性腸炎病毒gB蛋白抗體IgG。用于免疫鴨病毒性腸炎疫苗后的抗體動(dòng)態(tài)水平監(jiān)測(cè)，指導(dǎo)免疫預(yù)防工作，評(píng)估鴨病毒性腸炎免疫狀況，也可用于該病的流行病學(xué)調(diào)查。
實(shí)驗(yàn)步驟
需要自備的器材；微量移液器，微量移液器配套使用的槍頭，用來(lái)稀釋洗滌液的500ml量筒，適用于檢測(cè)96T微孔板的酶標(biāo)儀，用于稀釋樣品的1.5ml Ep管，蒸餾水或去離子水。
樣品的制備；用樣品稀釋液將待檢血清樣品進(jìn)行100倍稀釋（建議：2μl血清樣品加入198μl樣品稀釋液中），樣品加入包被板前要充分混勻，稀釋不同待檢樣品注意更換槍頭。注意：①制備血清用的血液樣本應(yīng)無(wú)溶血現(xiàn)象發(fā)生；②不能稀釋陰性、陽(yáng)性對(duì)照。
操作步驟；在A1和A2孔中分別加入100μl陰性對(duì)照；在A3和A4孔中分別加入100μl陽(yáng)性對(duì)照；取100μl經(jīng)1：100稀釋好的待檢樣品加入相應(yīng)孔中，并做好記錄；37℃孵育1h；將各孔的液體棄入廢液桶，每孔加250μl的洗滌液（試劑盒內(nèi)20×濃縮洗滌液需用蒸餾水或去離子水稀釋后方可使用。如有結(jié)晶，需先溶解后，方可進(jìn)行稀釋）進(jìn)行洗板，重復(fù)5次，每次30s；加液時(shí)防止各孔間洗滌液串流影響檢測(cè)結(jié)果，盡量將孔內(nèi)洗滌液拋甩干凈；每孔加100μl酶標(biāo)結(jié)合物；37℃孵育1h；重復(fù)步驟3.5；每孔加100μl底物液；37℃孵育10min（避光顯色）；每孔加100μl的終止液；立刻于450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度值，即OD450值。
試驗(yàn)有效性判斷；陰性對(duì)照：正常情況下，陰性對(duì)照孔OD450值≤0.2；陽(yáng)性對(duì)照：正常情況下，陽(yáng)性對(duì)照孔OD450值≥0.4；臨界值(C.O.)計(jì)算：臨界值=0.2+陰性對(duì)照均值；陰性對(duì)照OD450值大于0.2時(shí)應(yīng)舍棄，如所有陰性對(duì)照OD450值均大于0.2時(shí)須重復(fù)實(shí)驗(yàn)；陰性對(duì)照低于0.05時(shí)以0.05計(jì)算。
結(jié)果判定： 檢測(cè)樣品OD450值≥臨界值，判定該檢測(cè)樣品為陽(yáng)性； 檢測(cè)樣品OD450值＜臨界值，判定該檢測(cè)樣品為陰性。
